Meskipun sudah banyak kit untuk isolasi plasmid DNA dari bakteri (miniprep), cara manual juga masih merupakan pilihan yang bagus. Namun miniprep manual memiliki kelemahan yaitu plasmid DNA hasil isolasi tidak bisa langsung digunakan untuk keperluan sequencing. Tapi kelemahan ini bisa dicover dengan cara melakukan purifikasi dengan menggunakan PEG (Polyethylene glycol). Urutan metodenya sebagai berikut.
-
DNA (from manual miniprep) + water about 100 uL.
-
Add 0.1 mg/mL RNAse 10 uL, and incubate 1 hour at 37oC.
-
Add 20% PEG/2.5 NaCl, tapping, don’t vortex.
-
Keep in -20oC for at least 1 hour.
-
Spin 12.000 rpm for 15 minutes at 4oC, discard sup by pipetting.
-
Wash with 70% Ethanol.
-
Re-spin for 5 minutes.
-
Dry up (vaccum) 3 – 5 minutes.
-
Dissolve in 35 mL of TE buffer or water.
-
Re-check on Agarose Gel Electrophoresis.
